Bacterii identificare

1. Mediu cu geloza-sange, turnat in placa Petri: colonii bacteriene de 2-3 mm, rotunde, margini regulate, bombate, cremoase, galben-aurii,opace, care produc in jur hemoliza beta (completa,clara) = probabil o cultura de Stafilococcus aureus

2.Mediul Chapman = mediu selectivo- diferential

Selectivo= contine NaCl 7.5%, permite cresterea exclusive a stafilococilor, care tolereaza sarea (nu necesita prezenta sari, dar o tolereaza, celelalte bacterii nu o tolereaza).

Diferential= contine un zahar numit manita, pe care stafilococii il fermenteaza sau nu.

Manito-pozitivi= ingalbenesc mediul din jur

Manito-negativi= formeaza colonii incolore, care imprumuta culoarea mediului.

Specia Stafilococcus aureus este manito-pozitiva.

3.Geloza lactozata (mediul Istrati-Meitert)- mediul contine lactoza, care permite impartirea bacililor Gram negative in 2 categorii:

-lactozo-pozitivi=mediul devine galben: Escherichia Coli, Klebsiella, unele specii de Enterobacter.

-lactozo-negativi= nu fermenteaza lactoza, formeaza colonii care imprumuta culoarea verde a mediului: Salmonella, Shigella, Proteus, Yersinia.

4. Antibiograma

-se foloseste mediul Muller-Hinton (mediu folosit doar pentru antibiograma)

-e optim, permite cresterea majoritatii bacteriilor

-nu are efecte antagonice antibioticelor

-este izoton cu sangele, care se poate adauga pentru cultivarea bacteriilor pretentioase

-mediul trebuie turnat cu o inaltime de 4 mm.

Pentru a face o antibiograma se prepara o suspensie bacteriana (cultura in ser fiziologic steril(5ml) +4 colonii bacteriene)

Suspensia obtinuta se compara cu un etalon de turbiditate sau cu nefelometrul.

Suspensia se aplica pe toata suprafata mediului Muller Hilton

Se usuca(acoperit partial cu capacul) aproximativ 15 minute.

Se aplica discurile la 2,4 cm intre ele si la 1,5 cm fata de margine.

Se acopera placa cu capacul.

Se lasa 15 minute pe masa pt difuzarea antibioticelor in mediu (inainte de cresterea culturilor).

Se pune placa in thermostat la 37ºC intre 24-48 h.

Dupa 24 h se citesc rezultatele:- se masoara cu rigla diametrul zonelor de inhibitie a cresterii bacteriene.

Se interpreteaza cu tabelele calificative: R=rezistent, nu se adm antibioticul; IS=intermediary sensibil, se adm in doze mari in anumite situatii clinice, S=sensibil, se administreaza antibioticul in doze uzuale

5. Erorile antibiogramei:

a)legate de mediu:

-folosirea altui mediu decat Muller-Hinton

-folosirea mediului Muller Hinton expirat

-folosirea mediului Muller Hinton direct din frigider

-turnarea mediului:prea gros,prea subtire, inclinat (normal e 4mm inaltime pe toata suprafata)

b)legate de inocul:

-prepararea inoculului dintr-o cultura veche ( >24 h)-se prefera cultura de maxim 24h

-inocul din cultura plurimicrobiana

-nestandardizarea inoculului

c)legate de discuri:

-folosirea altor antibiotice decat cele recomandate pentru bacteria respective

-discurile sa nu fie din frigider (minim 30 minute inainte de aplicare la temp camerei)

-discurile sa nu fie expirate

-se face controlul de calitate cu tulpini de referinta cand se incepe alt lot de rondele

d)legate de tehnica:

-nerespectarea intervalelor de timp (15 min uscare, 15 min difuzia antibioticelor in mediu, 24 h perioada de incubare)

-nerespectarea temperaturii de incubare

-citirea diametrelor cu ochiul liber

-nerespectarea distantelor intre rondele

6.Teste de identificare biochimica a Enterobacteriilor

a) mediul TSI (triple sugar iron), rozaliu, solid, inclinat, mediu multitest

-- microbul fermenteaza Glucoza=mediul se ingalbeneste la fundul tubului. Glucoza poate fi fermentata cu sau fara producerea de gaz(bula/ridica mediul in tub)

--bacteria fermenteaza Lactoza sau Zaharoza - fermenteaza partea inclinata a mediului

Daca bacteria produce hydrogen sulfurat in mediu apar portiuni colorate in negru

b)Mediul MIU (mobilitate indol ureaza)

mobilitate= bacteria mobile invadeaza tot mediul, cea imobila crested oar pe linia de insamantare

indol= banda de indol pozitiva devine rosie (Escherichia Coli= indol +)

ureaza=mediul devine rosu (Klebsiella, Proteus)

c)Mediul Simmons=citrat (vernil)

pozitiv= albastru intens (bacteria consuma citrate ca sursa de carbon)

negative=verde

d)Mediul Malonat (lichid vernil)

pozitiv= albastru (bacteria consuma malonat)

negativ=vernil

7.Teste de identificare Stafilococ

A)Reactia catalazei  H2O2 + suspensia bacteriana= bule (reactie pozitiva, =stafilococ)

B) beta-hemoliza

C)pigment auriu

D) mediul Chapman-fermenteaza manita

E)Trusa care arata producerea de coagulaza (coagulazo pozitiv)= stafilococ

    Tub cu plasma de iepure + cultura bacteriana= dupa minim 8 h de thermostat, reactia este pozitiva cand: apar cheaguri mici in lichid, sau coagulare in medusa, sau inchegare in masa. 98% din stafilococi fac coagulaza (cea mai constanta calitate)